Nas últimas décadas, os avanços na tecnologia e na produção exigiram o desenvolvimento de métodos analíticos precisos e confiáveis. Inúmeros estudos para testes analíticos foram propostos criando diversos parâmetros de respostas que levam a conflitos de interpretação. Para comparar e verificar a confiabilidade desses métodos, agências e instituições reguladoras determinam e regulamentam normas que permitem sua validação, certificando como parâmetros metodológicos a serem seguidos. No Brasil, o INMETRO é a agência reguladora para validação de metodologias analíticas, orientando a validação de métodos através do documento DOQ-CGCRE-008, bem como as normas relativas a cada analito. A citometria de fluxo é fonte de pesquisa em metodologias analíticas para quantificação da contagem padrão em placas (CPP) e contagem de células somáticas (CCS) em amostras de leite cru. No Brasil, essa metodologia é referenciada pelo Ministério da Agricultura e Pecuária (MAPA), como a que deve ser seguida pelos laboratórios da Rede Brasileira de Laboratórios de Controle de Qualidade do Leite (RBQL) para análise de CCS e CPP, em atendimento a Instrução Normativa 77 de 2018. O objetivo do presente estudo foi validar os limites de quantificação das contagens de CPP e CCS utilizando a metodologia de citometria de fluxo, seguindo o documento orientativo DOQ-CGCRE008, assim como as normas relacionadas a cada analito. Em relação aos parâmetros analíticos empregados para a validação, a linearidade, a exatidão, a precisão e a avaliação da incerteza de medição foram avaliados antes da determinação dos limites de quantificação. A exatidão foi confirmada pela comparação de métodos (oficial e citometria de fluxo), em que se observou correlação positiva, também avaliada pela calibração usando material de referência certificado e pelo estudo do ensaio de proficiência por meio da avaliação do Z escore. A precisão foi confirmada pela repetibilidade e reprodutibilidade. A incerteza de medição foi avaliada no analito contagem de células somáticas. Após analises, observou-se que os dados estatísticos se encontravam dentro dos limites estabelecidos pelas normas e consonantes com os verificados na literatura. O presente estudo determinou como limite de quantificação 1 UFC x 1000/mL para contagem padrão em placas (CPP) e 1 célula x 1000/mL para contagem de células somáticas (CCS). Este trabalho evidencia a importância da validação de métodos, o que possibilita o conhecimento das limitações e da confiabilidade das medidas realizadas, assim como os limites de quantificação determinados.

Palavras-chave: Qualidade, leite, contagem bacteriana, contagem de células somáticas, citometria de fluxo, validação, limite de quantificação