Este trabalho descreve a validação de um método multiclasse para análise simultânea de micotoxinas e resíduos de pesticidas em alimentos para animais (rações para suínos, aves, gatos e cães) por cromatografia líquida de ultra alta performance acoplada à espectrometria de massa sequencial (UHPLC-MS/MS). Amostras branco foram fortificadas com soluções padrões de micotoxinas e de pesticidas, foram hidratadas e os analitos foram extraídas com solução de acetonitrila:ácido acético (98:2, v/v). Após centrifugar, o sobrenadante foi purificado usando d-SPE, com terra diatomácea e sulfato de magnésio. Para identificação e quantificação dos analitos, o espectrômetro operou com uma fonte eletrospray, nos modos de polaridade positiva e negativa. A separação cromatográfica foi obtida aplicando uma eluição com gradiente e tempo de corrida de 11 minutos e 30 segundos. Pelo menos duas transições foram selecionadas para cada analito, uma para quantificação outra para confirmação. A performance do método foi avaliada, também com diluição isotópica para 11 das micotoxinas, com a adição de padrões isotopicamente marcados aos extratos das amostras e às soluções da curva de calibração. O método foi validado de acordo com os critérios descritos no Manual de qualidade analítica do Ministério da Agricultura e Pecuária, e nos regulamentos da União Europeia: SANTE 12089/2017, EU/2872/2023 e SANTE/11312/2021. Foram avaliados os parâmetros: exatidão (recuperação%), precisão (RSD%), seletividade, linearidade (R2), limites de quantificação (LQ) e de detecção (LD), incerteza (U) e efeitos de matriz (ME%). A veracidade foi demonstrada com a participação em ensaios de proficiência. O método validado mostrou precisão e exatidão adequadas para a quantificação de 35 micotoxinas e de 165 pesticidas, apresenta abaixo custo, é simples e rápido de executar e demonstra capacidade para gerar resultados confiáveis. A aplicabilidade do método foi demonstrada, para micotoxinas, pela análise de 142 amostras de ração para cães, gatos, bovinos, aves, suínos, equinos e peixes e de ingredientes de ração com o monitoramento das 35 micotoxinas. Das amostras analisadas, 98% apresentaram contaminação, por alguma das 35 micotoxinas e 96% apresentaram coocorrência de duas ou mais micotoxinas, com uma amostra contaminada com 18 micotoxinas. O método é uma ferramenta, com potencial para ser usado em análises simultâneas de micotoxinas e pesticidas em fiscalização e monitoramento alimentos para animais. O uso de um método validado possibilita gerar dados confiáveis para serem usados em estudos de avaliação de risco, e contribui para o controle de qualidade e a segurança alimentar dos consumidores além de contribuir para o desenvolvimento, a eficiência reprodutiva o bem estar dos animais.

Palavras-chave: Validação; método multiclasse; LC-MS/MS; efeito de matriz; alimentos para animais; micotoxinas; resíduos de pesticidas; monitoramento; coocorrência.