A tuberculose é uma doença infecciosa crônica causada por Mycobacterium spp. do complexo Mycobacterium tuberculosis (CMBT), com relevante impacto na saúde pública e na conservação da vida silvestre. Em ambientes sob cuidados humanos, como zoológicos, a proximidade entre diferentes espécies, o caráter crônico da doença e o contato frequente com pessoas pode favorecer a transmissão intra e interespecífica do agente. O presente estudo teve como objetivo investigar a presença de infecção por Mycobacterium spp., com ênfase nos ecótipos do CMBT, em mamíferos silvestres mantidos no Jardim Zoológico de Belo Horizonte, Minas Gerais Minas Gerais (original name) Minas Gerais , bem como caracterizar aspectos histopatológicos, moleculares e inferir sobre o perfil epidemiológico da infecção nesse ambiente. Trata-se de um estudo retrospectivo e prospectivo, conduzido a partir da análise de amostras biológicas coletadas entre 2020 e 2025, incluindo swabs, lavados respiratórios e tecidos obtidos in vivo e post-mortem de diferentes espécies de mamíferos silvestres. O DNA das amostras foi avaliado por do tipo nested e PCR em tempo real para a detecção Mycobacterium spp. e a identificação de ecótipos do CMBT. Foram analisadas 65 amostras de 35 animais. A nested PCR detectou Mycobacterium spp. em 45 amostras. Na PCR em tempo real, seis amostras foram positivas para IS1081 e quatro para RD4.88, todas provenientes de tecidos de necropsia. O isolamento bacteriano foi realizado em amostras de oito animais, com crescimento compatível em quatro deles: dois elefantes africanos, uma onça parda e uma onça pintada. A qPCR dos isolados identificou Mycobacterium bovis em todos os casos. O sequenciamento genômico revelou os sequence types ST215 (elefantes) e ST269 (felinos). Dois spoligotypes foram detectados: SB0881 nos felinos e SB2892 nos elefantes, este último descrito pela primeira vez e incorporado ao banco internacional. A histopatologia de sete animais evidenciou lesões granulomatosas e antígenos de Mycobacterium spp., confirmando infecção ativa. Os achados reforçam a necessidade de vigilância contínua e de uma abordagem integrada de Saúde Única para prevenir e controlar a tuberculose em ambientes de zoológico.

Palavras-chave: tuberculose animal; zoonose; saúde única; diagnóstico; sequenciamento genômico.