Embora a criopreservação do sêmen equino possibilite a preservação e o transporte do

material genético, o processo de congelamento provoca danos aos espermatozoides. O plasma

seminal (PS) possui em sua composição vesículas extracelulares (EVs), partículas carreadoras de

moléculas, que atuam como mediadores da comunicação intercelular. O objetivo deste estudo foi

melhorar a qualidade do sêmen criopreservado equino com a adição de EVs do PS heterólogo de

um garanhão com motilidade progressiva alta. As EVs foram isoladas do PS e preservadas em dois

diferentes veículos Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline (D-PBS) e BotuCrio® diluidor de

congelamento de sêmen equino. Para testar o efeito das EVs sobre a qualidade espermática do sêmen

de seis garanhões, este foi congelado (100 × 106 espermatozoides/ml) com diluidor de congelamento

de sêmen equino BotuCrio® e suplementado com 400 e 800 × 106/ml de EVs. Foram realizados sete

tratamentos: 1) Controle, 2) D-PBS sem EVs, 3) D-PBS + 400 × 106/ml EVs, 4) D-PBS + 800 ×

106/ml EVs, 5) BotuCrio® sem EVs, 6) BotuCrio® + 400 × 106/ml EVs, e 7) BotuCrio® + 800 ×

106/ml EVs. As amostras de sêmen foram descongeladas e analisadas quanto aos parâmetros de

motilidade e cinemática com o sistema de análise espermática computadorizado, morfologia com

microscopia de contraste de fase, funcionalidade de membrana plasmática com o teste hiposmótico

(HOST), integridade de membrana plasmática, taxa de reação acrossômica e potencial de membrana

mitocondrial espermáticos com citometria de fluxo. Os dados foram analisados com análise de

variância (ANOVA) e testes de pressupostos (Shapiro-Wilk para normalidade e Bartlett para

homocedasticidade). As médias foram comparadas utilizando o teste de Tukey. Nos casos em que

os pressupostos não foram atendidos, aplicou-se o teste de Skillings-Mack, seguido pelo teste de

Durbin para comparação entre os grupos. A probabilidade de P<0,05 foi considerada significativa.

No presente trabalho foi observado que a adição de PBS sem as EVs resultou em uma redução

significativa do parâmetro de cinemática frequência do batimento cruzado de cabeça (BCF) (8,7 ±

0,3 Hz) quando comparado ao controle (9,5 ± 0,5 Hz). As outras variáveis de motilidade e

cinemática espermática e os outros parâmetros avaliados não foram afetados pelos tratamentos. Em

conclusão, as concentrações testadas de EVs derivadas do plasma seminal não influenciaram a

qualidade do sêmen equino após o descongelamento.

Palavras chave: epididimossomos; reprodução; criopreservação; espermatozoide; garanhão;

congelamento